目前,农药残留快速检测方法很多,按分类可分为生化检测法和色谱快速检测法。生化检测法中又以酶抑制法应用最为广泛。该法由于操作简单,成本较低,较短时间内能检测大量样本(每次检测时间约20分钟),特别适合在果蔬生产基地和蔬菜批发市场使用。我站新引进"NC一800"农药残留快速测定仪,就是利用生物体内提取液进行生化反应来判断是否存在农药残留及污染的情况。此项工作开展1年来,检测准确率高、效果好,群众很受欢迎。
一、工作原理
在一定条件下,有机磷和氨基甲酸脂类农药能抑制乙酰胆碱酶的活性,其抑制率与农药的浓度呈正相关,加入反应试剂——酶后,应用分光光度法测定吸光值随时间的变化值计算出抑制率,来判断农药残留是否超标。
二、操作步骤
1.样品提取取2克蔬菜样品(叶菜类要剪成宽度1厘米左右的菜样,块根菜取1厘米左右的表皮样品)放入三角瓶中,用专用移液器,加入10毫升缓冲液振荡2分钟后倒入放有过滤纸的三角瓶上,滤出的液体即为待测试报。
2.样品测试在1厘米的比色皿中,加入酶100微升,然后加入待测试液2.5毫升,摇匀,静置10分钟后,再加入显色剂100微升,然后加底物20微升,摇匀后马上放入测定仪,按“样品测量”键,1分钟后,数据结果马上可打印出来(可贮存3000条数据)。由于测定仪有6个样品通道,可同时测6个样品。
3.结果判断样品的抑制率在40%~50%之间,为怀疑农药含量超标,为求数据准确性,最好重做1次;或用气相色谱法进一步确认,若抑制率大于50%即为农药超标。
三、注意事项
1.磷酸盐缓冲液的配置一定要用蒸馏水或纯净水或矿泉水,否则影响准确性。
2.酶试剂及底物要在0~5℃温度条件下保存,以确保酶的活性,因此,应在冰箱中保存,但不能冻至结冰。
3.微量移液器要专用,贴上标签,避免交叉使用造成试剂污染;试剂从试剂瓶吸出后,不能再放回瓶中,坚持只吸不进的原则,防止试剂污染。
4.样品测试的最后一道程序,即加底物后,应马上摇匀,放入测定仪,否则影响数据准确性。经实践,在菠菜样品的测试中,立刻放入的抑制率为21.4%,1分钟后放入的51.7%,可见,加试剂后放入时间的长短可影响其准确性。
5.韭菜、芹菜、蒜、葱及茄汁液中含有对酶有影响的植物次生物质,容易产生假阳性。因此.,处理这类样品时,可采取整株蔬菜浸出提取液的方法(不要搞烂样品)。对叶绿素含量较高的蔬菜,也可采取类似方法。
6.该法只是定性检测法,只能检测有机磷和氨基甲酸酯类农药,不适用于其它类型农药的检测。
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